|
Szczegóły Produktu:
|
| Nazwa produktu: | Ligaza DNA | 10299ES40: | 40 000 jednostek |
|---|---|---|---|
| 10299ES42: | 400 000 jednostek | 10299ES83: | 1 600 000 jedn |
| Wejściowy mole DNA (pmol): | Wejściowe DNA (ng)/ [0,66 × średnia długość wejściowego DNA (pz)] | Aplikacja: | WYŁĄCZNIE do celów badawczych! |
| High Light: | 400 U / UL T4 ligaza DNA,ligaza badawcza DNA T4,odczynnik biochemiczny ligaza DNA T4 |
||
Szybka ligaza DNA T4 (400 U/µl)
Fast T4 DNA Ligase to pojedynczy produkt enzymatyczny, który można wykorzystać do łączenia fragmentów DNA i adaptera w procesie budowy biblioteki NGS.Produkt został zweryfikowany przez sekwencjonowanie o wysokiej przepustowości i ma doskonałą jakość.Enzym ten ma wysoce wydajną zdolność ligacji, która jest bardzo odpowiednia do ligacji złożonych fragmentów kwasu nukleinowego, takich jak adapter Ω platformy MGI.Zaleca się wybór modułu Hieff NGSTM Ultima DNA Ligation Module (nr kat. 12604), którego podstawowym składnikiem jest Fast T4 DNA Ligase dla klientów, którzy nie potrzebują regulacji systemu.
| Nazwa produktu | Kot# | Rozmiar |
| Szybka Ligaza DNA T4 (400 U/µL) | 10299ES40 | 40 000 jednostek |
| 10299ES42 | 400 000 jednostek | |
| 10299ES83 |
1 600 000 jedn |
Opis produktu oSzybka ligaza DNA T4
Fast T4 DNA Ligase to pojedynczy produkt enzymatyczny, który można wykorzystać do łączenia fragmentów DNA i adaptera w procesie budowy biblioteki NGS.Produkt został zweryfikowany przez sekwencjonowanie o wysokiej przepustowości i ma doskonałą jakość.Enzym ten ma wysoce wydajną zdolność ligacji, która jest bardzo odpowiednia do ligacji złożonych fragmentów kwasu nukleinowego, takich jak adapter Ω platformy MGI.Zaleca się wybór Hieff NGSTMUltima DNA Ligation Module (nr kat. 12604), którego podstawowym składnikiem jest Fast T4 DNA Ligase dla klientów, którzy nie potrzebują regulacji systemu.
Składnik produktus zSzybka ligaza DNA T4
| Numer komponentu | składniki | Kot#/Rozmiar | ||
| 10299ES40 | 10299ES42 | 10299ES83 | ||
| 10299-A | Szybka Ligaza DNA T4 (400 U/µL) | 100 µl | 1 ml | 4 ml |
| 10299-B | 10 × bufor ligazy DNA T4 | 250 μL | 5 × 500 μL | 10 ml |
Instrukcje
1. Obecne zestawy do budowy bibliotek DNA głównego nurtu generalnie nie są oczyszczane po naprawie końca i obróbce typu A-Tailing i bezpośrednio wykonują ligację adapterów.Proszę odnieść się do poniższego przygotowania układu reakcyjnego.Dokładnie zworteksować, krótko odwirować i inkubować przez 15 min w 20°C.
| składniki | Objętość (μl) |
| DNA z ogonem dA | 60 |
| 10 × bufor ligazy DNA T4 | 10 |
| 50% PEG 6000 | 10* |
| Adapter DNA | X** |
| Szybka Ligaza DNA T4 (400 U/µL) | 1-5*** |
| ddH2O | Do 100 |
[Notatka]:*50% PEG 6000 nie znajduje się w zestawie, należy go przygotować samodzielnie.
**W celu uzyskania informacji o ilości adaptera należy zapoznać się z poniższą tabelą.
***IlośćSzybkoStosowana ligaza DNA T4 może być dodana w razie potrzeby 1-5 µl.
2. Jakość i stężenie użytych adapterów bezpośrednio wpływa na wydajność ligacji i wydajność biblioteki.Zbyt duże użycie adaptera może generować więcej dimerów adaptera, podczas gdy mniejsze użycie może wpłynąć na wydajność ligacji i wydajność biblioteki.W poniższej tabeli wymieniono zalecaną ilość adaptera używanego w różnych sytuacjach wprowadzania DNA przy użyciu tego zestawu.
| Wprowadź DNA |
Adapter: Wprowadź DNA (stosunek molowy) |
Wprowadź DNA |
Adapter: Wprowadź DNA (stosunek molowy) |
| 1 μg | 10:1 | 50 ng | 100:1 |
| 500 ng | 20:1 | 25 ng | 200:1 |
| 250 ng | 40:1 | 1 ng | 200:1 |
| 100 ng | 100:1 | 500 pg | 400:1 |
[Uwaga]: Wejściowy mole DNA (pmol)≈ Wprowadzone DNA (ng)/ [0,66 × Wprowadzone DNA średnia długość (bp)].
Krok 1: Oblicz liczbę moli wejściowego DNA.Wzór: Wejściowy mole DNA (pmol)≈ Wejściowe DNA (ng)/ [0,66 × Wejściowe DNA średnia długość (bp)];Wejściowy mol DNA (pmol)=100 ÷ (0,66×300) = 0,5 pmol;
Krok 2: Zgodnie z powyższą tabelą oblicz ilość moli dodanego adaptera;Gdy DNA wejściowe wynosi 100 ng, stosunek molowy adapterów do DNA wejściowego wynosi 100:1, a liczba moli dodanych adapterów = 100×0,5 pmol=50 pmol;
Krok 3: Oblicz objętość dodawania adaptera.Stężenie adaptera = 15 μmol/L (w przypadku korzystania z adaptera innej firmy należy określić jego stężenie zgodnie z jego instrukcją);Objętość dodanego adaptera = mole dodanego adaptera (50 pmol) ÷ stężenie adaptera (15 μmol/L) = 3,34 μL (Uwaga: 15 μmol/L = 15 pmol/ μL);
W podsumowaniu, objętość, do której można dodać adapter, wynosi 3,4 μl.(Uwaga: maksymalna objętość dodawania adaptera nie przekracza 5 μl).
Produkt jest dostarczany z lodami i może być przechowywany w temperaturze -20°C przez dwa lata.
Definicja jednostki
W 20 μl systemie reakcji ligacji, gdy 6 μg λDNA-Hind Ⅲ poddaje się reakcji w temperaturze 16°C przez 30 minut, ilość enzymu wymagana do uzyskania ponad 50% ligacji fragmentów DNA została zdefiniowana jako jedna jednostka (U).
Przestrogi
1. Ligaza DNA T4 jest wrażliwa na fizyczną denaturację.Podczas mieszania delikatnie odwrócić probówkę i dobrze wstrząsnąć.Nie wstrząsaj energicznie;
2. Enzymy powinny być przechowywane w lodówce lub w łaźni lodowej, gdy są używane, i powinny być przechowywane w temperaturze -20°C natychmiast po użyciu;
3.Ten produkt jest przeznaczony WYŁĄCZNIE do celów badawczych!
4.Dla własnego bezpieczeństwa i zdrowia podczas pracy należy nosić fartuchy laboratoryjne i jednorazowe rękawiczki.
Jeśli potrzebujesz więcej informacji na temat tej ligazy DNA Fast T4 (400 U/µL), skontaktuj się z nami, dziękuję
Osoba kontaktowa: Ms Kris
Tel: +8613049739311
