Szybkie trawienie DNA 5-15 minut Enzym BsaI Biochemiczny odczynnik CE Zatwierdzony

Enzymy BsaI

enzymy to seria zaprojektowanych enzymów restrykcyjnych do szybkiego trawienia DNA w 5-15 minut.Enzymy można stosować do trawienia plazmidowego, genomowego i wirusowego DNA, a także produktów PCR.Wszystkie enzymy wykazują lepszą aktywność w buforze uniwersalnym, dzięki czemu uproszczono system reakcji trawienia enzymatycznego.Ponadto enzymy zapewniają doskonałą redundancję enzymów, umożliwiając łatwe trawienie nadmiaru substratu lub trudnych szablonów.

Wysyłka i przechowywanie

Komponenty są dostarczane z lodem i mogą być przechowywane w temperaturze -20°C przez 2 lata.

Miejsce cięcia

5'-GGTCTC(N)1-3'

3'-CCAGAG(N)5-5'

Zalecane warunki reakcji

1× bufor FuniCut™;Inkubować w 37 ℃.

Dezaktywacja termiczna

Inkubacja w 80℃ przez 20 min.

Kontrola jakości

1. Definicja działalności:1 μg DNA pPIC9K strawiono całkowicie 1 μl enzymu w ciągu 15 minut w temperaturze 37°C w całkowitej objętości reakcyjnej 20 μl.

2. Przedłużona inkubacja/test aktywności gwiazd:Brak wykrywalnej degradacji 1 μg DNA pPIC9K ze względu na zanieczyszczenie nukleazą lub aktywność gwiazd podczas inkubacji z 1 µl FuniCut™ BsaI przez 3 godziny w temperaturze 37℃.Dłuższa inkubacja może skutkować aktywnością gwiazd.

3. Test ligacji i rozszczepiania (L/R):Po strawieniu 1 μL enzymu w optymalnych warunkach, produkt z recyklingu można zligować pod ligazy DNA T4 w temperaturze 22℃.Produkt ligacji może być ponownie rozszczepiony przez enzym.

4. Niespecyficzna aktywność endonukleazy:Inkubacja 1 μl enzymu z 1 μg superskręconego plazmidowego DNA przez 4 godziny w temperaturze 37°C nie spowodowała zmiany stanu superskręconego.

Instrukcje

1. Protokół szybkiego trawienia różnych DNA

1.1 Połącz następujące składniki reakcji na lodzie we wskazanej kolejności:

[Uwaga]: *Dla oczyszczonych produktów PCR.Kwota 10×Bufor FuniCut™można zmniejszyć do 2 μl ze względu na pozostałą siłę jonową nieoczyszczonych produktów PCR.Zaleca się, aby produkt PCR został oczyszczony przed trawieniem, gdy produkt PCR będzie używany do klonowania.

1.2 Delikatnie wymieszać (nie worteksować) i odkręcić.

1.3 Inkubować w temperaturze 37°C przez 15 min (plazmidowe DNA) lub przez 15-30 min (produkt PCR) lub przez 30-60 min (genomowy DNA).

1.4 Opcjonalnie: Dezaktywuj enzym przez ogrzewanie przez 20 min w 80 ℃.

2. Podwójne i wielokrotne trawienie DNA

2.1 Użyj 1 μl każdego enzymu i odpowiednio zwiększ skalę warunków reakcji.

2.2 Łączna objętość enzymów w mieszaninie reakcyjnej nie powinna przekraczać 1/10 całkowitej objętości reakcji.

2.3 Jeśli enzymy wymagają różnych temperatur reakcji, zacznij od enzymu, który wymaga niższej temperatury, następnie dodaj drugi enzym i inkubuj w wyższej temperaturze.

3. Skalowanie reakcji trawienia plazmidowego DNA

[Notatka]: Inkubacja w termostacie wodnym, termostacie metalowym lub termostacie piaskowym.Wydłuż czas inkubacji, jeśli całkowita objętość reakcji przekracza 20 μl.

Liczba miejsc rozpoznania w DNA